3’端标记有bhq2荧光淬灭基团；上述taqman探针(cpiv-p)的5’端标记有hex荧光报告基团，3’端标记有bhq2荧光淬灭基团。本发明的另一方面提供一种用于对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测及鉴别的试剂盒，包括上述的引物和taqman探针组；使用上述试剂盒时的25μl实时荧光定量pcr检测体系中所述引物和taqman探针的用量推荐为：10μm的4×混合引物μl，10μm的4×混合探针μl，其中所述4×混合引物为cav2-f、cav2-r、cdv-f、cdv-r、cpv-f、cpv-r、cpiv-f、cpiv-r的等浓度混合，推荐地，其中各引物的浓度为10μm，所述4×混合探针为cav2-p、cdv-p、cpv-p、cpiv-p的等浓度混合，推荐地，其中各探针的浓度为10μm。上述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品，阳性对照品为犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的基因组dna或rna，各阳性对照品为单一包装或混合包装，阴性对照品为不含犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的反应体系，如h2o(双蒸水、无菌去离子水等)。武汉附近的宠物医院！黄陂区好的细小病菌排名

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    标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl。检测结束后，以各标准品的浓度log值(x轴)对其相应ct值(y轴)作图，绘制标准曲线，标准曲线如图3所示，其中cav2相关系数为r2＝，误差较小，标准曲线可用，由标准曲线得到的线性方程为：y＝，cdv相关系数为r2＝，误差较小，标准曲线可用，由标准曲线得到的线性方程为：y＝，cpv相关系数为r2＝，误差较小，标准曲线可用，由标准曲线得到的线性方程为：y＝，cpiv相关系数为r2＝，误差较小，标准曲线可用，由标准曲线得到的线性方程为：y＝。因此标准曲线可用于对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行四重实时荧光定量pcr检测。、对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行四重实时荧光定量pcr检测用本发明的四重实时荧光定量pcr检测方法对从金宇保灵生物药品有限公司疫苗研究室收集的10份犬源病料(待测样品)提取的dna或rna(检测样)进行检测，以灭活的cav-ii、cpv、cdv和cpiv细胞培养物提取的dna或rna为阳性对照样，以无酶水为阴性对照样，根据实时荧光定量pcr检测结果，对样本中cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行定性判定，并对bingdu的拷贝数进行定量。具体检测方法包括以下步骤：1)以从待测样品中提取的基因组dna或rna为模板。

    本发明属于生物检测技术领域：中的兽医动物病原检测，具体涉及一种用于犬腺bingduii型、犬瘟热bingdu、犬细小bingdu和犬副流感bingdu的四重实时荧光定量pcr检测方法、检测试剂盒及其**引物和taqman探针。背景技术：：犬瘟热bingdu(caninedistempervirus，cdv)、犬细小bingdu(canineprvovirus，cpv)、犬副流感bingdu(canineparainfluenzavirus，cpiv)和犬腺bingduii型(canineadenovirusii，cav-ii)是犬bingdu性传染病暴发和流行的主要病原体。cdv染上引起的犬瘟热主要有呼吸型、消化型、神经型和混合型4种，cdv染上可引起全身性的免疫压制，病死率极高。cpv主要引起犬的急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎。cpiv染上主要引起犬的呼吸道疾病，是犬传染性呼吸系统疾病重要的病原之一。cav-ii型引起与呼吸道疾病和肠炎相关的犬接触性呼吸道疾病，但不引起肺炎症状，可引起幼犬咳嗽又叫犬窝咳。这四种bingdu单一染上或混合染上均可给养犬业带来严重的打击，四种犬病原临床症状较为相似，且常伴有混合染上，给临床诊断造成了一定的困难。文献cna建立了用于同时检测犬瘟热bingdu、犬细小bingdu、i型和ii型犬腺bingdu的多重pcr检测引物。武汉治细小病菌哪里好？

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    cav2-p、cdv-p、cpv-p、cpiv-p)。具体地，cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测试剂盒包括以下用于25μl四重实时荧光定量pcr检测体系的试剂：模板5μl、实时荧光定量pcr反应液2×onestepu+μl(购于vazyme公司)、onestepu+μl(购于vazyme公司)、10μm-4×混合引物μl、10μm-4×混合探针μl，rna-freeh2o5μl。其中混合引物的混合方式为采用各引物的100μm原液，各取10μl混合，加无酶水补充至100μl，即每种引物的终浓度为10μm，混合探针的混合方式为采用各探针的100μm原液，各取10μl混合，加无酶水补充至100μl，即每种探针的终浓度为10μm。为方便检测，试剂盒中还可包括阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为cav-ii、cpv、cdv和cpivbingdu基因组dna或rna，所述阴性对照为不含cav-ii、cpv、cdv和cpiv的反应体系，如h2o(双蒸水、无菌去离子水等)。使用该试剂盒对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行四重实时荧光定量pcr检测时，将单一包装的阳性对照品混合或直接使用混合包装的阳性对照品。为方便检测，试剂盒中还可包括标准品，其为分别携带cav-ii、cpv、cdv和cpiv的目的基因的cav-ii标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品(参见实施例2)，各标准品可为单独包装。黄陂区好的细小病菌排名

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